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一、菌落總數微生物檢測板產(chǎn)品介紹
1、原理及適用范圍
菌落總數是指樣品經(jīng)過(guò)處理，在一定條件下培養后所得1 mL（g）檢樣或單位面積樣品中所含菌落的總數，是常用的微生物檢測項目。菌落總數檢測板是一種預先制備好的一次性培養基產(chǎn)品，含有標準的營(yíng)養培養基，吸水凝膠和脫氫酶指示劑氯化三苯基四氮唑（TTC），菌落在檢測板上呈紅色，這樣可縮短計數時(shí)間和增強計數效果。本產(chǎn)品適合于各類(lèi)食品及食品原料中菌落總數的測定。執行標準：《食品安全國家標準 食品微生物學(xué)檢驗 菌落總數測定》（GB 4789.2）。
2、菌落總數微生物檢測板操作方法
2.1 樣品處理：取樣品 25 mL（g）放入含有225 mL滅菌磷酸緩沖稀釋液（或生理鹽水）的取樣罐或均質(zhì)袋內，制成1:10的樣品勻液，需要時(shí)用1 mol/LNaOH或1mol/L HCl溶液調節樣品勻液pH至6.6～7.2。用1mL滅菌吸管吸取1:10稀釋液1 mL，注入含有9 mL稀釋液的試管內，振搖后成為1:100的樣品勻液，以此類(lèi)推，做出1:1000等稀釋度的樣品勻液，每次換一支吸管。
2.2 接種：一般食品選2～3個(gè)稀釋度進(jìn)行檢測，含菌量少的液體樣品（如飲用純水和礦泉水等）可直接吸取原液進(jìn)行檢測。將菌落總數檢測板置于平坦實(shí)驗臺面，揭開(kāi)上層膜，用無(wú)菌吸管吸取1 mL樣品勻液滴加到檢測板內，迅速貼好上層膜并水平晃動(dòng)檢測板，讓樣品勻液均勻吸附在濾紙上，靜置10s左右，待樣品勻液被吸附在濾紙上。每個(gè)稀釋度接種兩片。同時(shí)做一片空白陰性對照。
2.3 培養：將檢測板疊在一起，倒置于恒溫培養箱內。一般食品培養溫度為36℃±1℃，培養15～24 h；水產(chǎn)品培養溫度為30℃±1℃，培養48h。
3、結果判讀
細菌在檢測板上生長(cháng)后會(huì )顯示紅色斑點(diǎn)，選擇菌落數適中（30～300 CFU）的檢測板進(jìn)行計數，乘以稀釋倍數后即為每毫升（或每克）樣品中所含的細菌菌落總數。

4、計數原則及報告方式
4.1 若只有一個(gè)稀釋度檢測板上的菌落數在適宜計數范圍內，計算兩個(gè)檢測板菌落數的平均值，再將平均值乘以相應稀釋倍數，作為每克（或毫升）樣品中菌落總數結果。
4.2 若有兩個(gè)連續稀釋度的檢測板菌落數在適宜計數范圍內時(shí)，按式(1)計算: 

式中：
N——樣品中菌落數；
∑C——檢測板上(含適宜范圍菌落數的測試片)菌落數之和；
n1——*稀釋度（低稀釋倍數）檢測板數；
n2——第二稀釋度（高稀釋倍數）檢測板數；
d——稀釋因子(*稀釋度)。
示例：

上述數據經(jīng)“四舍五入”后，表示25000或2.5×104。
4.3 若所有的稀釋度菌落總數均大于300 CFU，則對稀釋度較高的檢測板進(jìn)行計數，其他檢測板可記錄為多不可計，結果按平均菌落數乘以較高稀釋倍數計算。
4.4 若所有的稀釋度菌落總數均小于30 CFU，則應按稀釋度*低的平均菌落數乘以稀釋倍數計算。
4.5 若所有的稀釋度（包括液體樣品原液）均無(wú)菌落生長(cháng)，則以小于1乘以*低稀釋倍數計算。
4.6 若所有稀釋度的平均菌落數均不在30 CFU～300 CFU之間，其中一部分小于30 CFU或大于300CFU，則以接近30 CFU或300 CFU的平均菌落數乘以稀釋倍數計算。
4.7 菌落總數的報告
4.7.1 菌落總數在100 CFU以?xún)葧r(shí)，按“四舍五入”原則修約，采用兩位有效數字報告。
4.7.2 大于或等于100 CFU時(shí)，第三位數字采用“四舍五入”原則修約后，取前兩位數字，后面的0代替位數，也可用指數形式來(lái)表示，按“四舍五入”原則修約后，采用兩位有效數字。
4.7.3 若測試片上一片紅色無(wú)法計數時(shí)，則報告多不可計。
4.7.4 若空白對照上有菌落生長(cháng)，則此次檢測結果無(wú)效。
4.7.5 固體樣品以CFU/g為單位報告，液體樣品以CFU/mL為單位報告。
5、附加說(shuō)明
5.1 菌落總數檢測板檢測結果與傳統平板計數瓊脂平板法符合率可達90％以上。
5.2 磷酸緩沖液稀釋液的配制與滅菌：貯存液：稱(chēng)取34.0 g分析純磷酸二氫鉀（KH2PO4）溶于500 mL蒸餾水或純凈水中，用大約175 mL的1 mol/L氫氧化鈉（NaOH）溶液調節PH至7.2，用蒸餾水稀釋至1000 mL后貯存于冰箱。稀釋液：取貯存液1.25 mL，用蒸餾水稀釋至1000 mL，分裝于適宜容器中，121℃高壓滅菌15 min，或放入消毒碗柜中消毒。
5.3 生理鹽水的配制與滅菌：取8.5 g分析純氯化鈉（NaCl）溶解到1000 mL蒸餾水或純凈水中，分裝于適宜容器中，121℃高壓滅菌15 min，或放入消毒碗柜中消毒。
5.4 注意使用過(guò)的檢測板上帶有活菌，需及時(shí)按照生物安全廢棄物處理原則進(jìn)行處理。